华威特鉴别诊断高致病性蓝耳病TJM株和野毒株一步法试剂盒(

猪繁殖与呼吸综合征（PRRS，俗称蓝耳病）是影响养殖业的首要传染病。过去因PRRS弱毒疫苗散毒、致病力返强及疫苗毒本身有很强的免疫抑制性等原因，使该病的防控束手无策。中国农业科学院研制的高致病性蓝耳病基因缺失疫苗（TJM株）彻底改变了这一现状。
为了在猪群中有效地区别接种疫苗和受野毒感染的猪，华威特生物科技有限公司于日前成功开发了“鉴别诊断高致病性PRRS野毒和疫苗株（TJM）RT-PCR一步法试剂盒”。应用本方法能快速确诊蓝耳病野毒感染，为蓝耳病疫情监测、优化防疫方案及蓝耳病毒的净化提供了关键技术手段，是使用高致病性猪蓝耳病疫苗（TJM株）时必需的配套技术。
本试剂盒有如下几个特点：1）操作简单，可在县级防疫中心及具备相似条件的实验室使用。由于对每个反应都进行标准化测试，不受操作人员技术熟练程度及环境因素的影响。2）灵敏度和特异性高，能检测到样品中数个病毒粒子的存在，不受样品种类的干扰。3）用时短，直接把样品RNA样品加入每个反应管后放入扩增仪即可，完成整个反应所需时间不超过4个小时。4）结果可靠、符合率高。
鉴于应用蓝耳病基因缺失疫苗是防疫大势所趋，华威特PRRS鉴别诊断试剂盒将为提升防疫质量做出重要贡献。

,非常实用。

祝贺研制成功！

祝贺！

       直接把样品加到反应系统中，减少了对基层检验实验室的技术要求，可以在很多兽药店内使用了。这将使基因检验技术不再神秘、不再遥远。真正为防疫形成加速度，在疫病爆发前夕就能派上用场。

进行使用培训学习的话 得用多长时间？

       有半天时间掌握主要环节的要点应该就可以使用了。
       常规PCR技术之所以在临床上不易掌握，主要是每次需要自己配制反应液，污染机会太高，当发现异常后再找问题就耽误工作了。
       RT-PCR比PCR更头痛的地方是步骤更多及RNA太娇气。许多时候等到反应结束才能知道制备的RNA是否理想，失败了又难找到真正原因，让人痛苦。
       使用本方法久了你就会觉得，其实在许多实验室也能做高水平的基因检验。

一步法早就出现了。

BIOXL高致病性猪蓝耳病一步法凝胶RT-PCR诊断试剂盒说明书（针对中国猪蓝耳病变异株检测）
一，产品简介
一步法突变型猪生殖与呼吸综合症病毒反转录PCR
检测临床样本和环境样本
包括48 个扩增反应所需的试剂48次/盒
请在使用前通读操作手册

二. 试剂盒组成
￭ 25 管 扩增反应试剂球 (Reagent Sphere; 4oC 保存)
￭ 2 x 520 μl PRRSV 扩增反应试剂球溶液 (Sphere Diluent; -20oC 保存)
￭ 2 x 25 μl 阳性对照 (Positive control; -20oC 保存)

三，保存条件
试剂球需置干燥剂中保存在4oC，已融解的试剂球则需保存在零下20oC。其它试剂亦需保存在零下20oC。使用前在冰上溶解各试剂并充分混合，不要旋涡振荡含酶的扩增反应试剂。

四. 操作程序
扩增反应试剂的准备
1. 计算所需的反应数量 (n)
2. 需要溶解的试剂球 = 0.5 x n
3. 每个试剂球需要 40 μl 试剂球溶液
4. 在冰上溶解试剂，并轻轻扣击充分混合 (不要旋涡振荡含酶的试剂)
反应的准备
1. 实验中除从样本中获得的RNA 模板外，我们还建议设置阳性和阴性（水）对照
2. 按照下表准备扩增反应试剂：
反应组分 每个反应体积
扩增反应试剂 20 μl
样品RNA 5 μl
总体积 25 μl
注意:
￭ 实验时 RNA 应放在冰上
￭ 阳性对照建议加5 μl 试剂盒提供的阳性对照。
￭ 建议PCR 过程中检测样本设置重复，以便得到可靠的实验结果
￭ 为了验证阴性实验结果不是由于样本中存有PCR 抑制物而导致PCR 呈阴性反应，我们建议在测试样本中加1 μl 的阳性对照作为spiking 对照 (spiking control)，同时进行PCR 反应。
PCR 循环:
1 个循环 42oC 30 分钟
95oC 10 分钟
40 个循环 95oC 30 秒
53oC 45 秒
72oC 30 秒

五. 实验数据分析
PCR 的产物需要通过2%琼脂糖凝胶电泳检测。野生型PCR 产物的长度为330 b.p.相对于变种型PCR 产物的长度为240 b.p.
Spiking 对照
阴性的实验结果有几个可能性：
1. 样本中不存在目的片段；
2. 样本中目的片段的量低于检测值；
3. 样本中存有 PCR 抑制物。试剂盒中设计spiking 对照 (spiking control) 是为了确定没有发生PCR 抑制。
如果样本中加了阳性对照以后得出阴性结果，说明样本中存在PCR 抑制物，那幺此次阴性的实验结果就不能作为正确的结果，需要重新开始样本核酸的提取和PCR 扩增。

       从“东一日照”所描述的内容来看，那是利用RT-PCR法区别高致病性PRRSV和经典PRRSV的方法。问题是，现在我国大多数地方流行的毒株都带有所谓的高致病性PRRSV的标志（缺失90nt），再使用上述方法的意义已不大。
       鉴别疫苗与野毒的方法其意义不仅停留在病原的诊断上，它是免疫预防的重要组成了。及时发时免疫猪场出现的野毒在调整防疫方案方面的意义不能低估。
       另外，目前我国许多诊断试剂实用性不佳。有更多的产品出现是通过市场竞争促进产业发展的好事。

区分经典毒株与高致病毒株，新的方法能更进一步