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卵子的培养和体外受精

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卵子的培养和体外受精    
(一)卵子培养  
   在卵巢上的囊状细胞或成熟卯泡细胞吸取尚处于第一次成熟分裂前期或成熟分裂开始的初级卵母细胞连同完整健全的卵丘细胞团,再特定的培养液中,使之继续发育,进行成熟分裂,达到受精的成熟阶段。此项技术为得到丰富的胚胎开辟了新途径,可以从即将淘汰的母畜卵巢得到卵泡卵子,或再屠宰前作超排处理,获得更多的发育卵泡,进行收集和培养(如同精子冷冻保存一样,共同组成种质储库)。
   (二)体外受精    
    指试管动物。应用此项技术可获得大量的胚胎,实现胚胎生产的工厂化。为胚胎移植及相应生物工程提供胚胎来源,在畜牧业中具有广泛的应用前景,其方法如下:    
    1.卵母细胞的采集 将动物屠宰后取出其卵巢,用生理盐水冲洗后,装入盛有生理盐水的保温瓶内运回实验室,用注射器针头从卵巢上未成熟的卵泡中抽取卵母细胞。
    2.体外培养成熟  将卵母细胞放在培养液中,在3912、5%00》气相条件下的培养箱中培养约24h,一般卵丘细胞显著扩张,从形态上可以确认达到成熟,在培养液中添加BSA(或犊牛血清)及促性腺激素、类固醇激素等可增加卵母细胞的成熟程度。
    3.精子获能  将精子放人人工合成的培养液中培养数小时。在培养液中添加肝素及咖啡因等利于精子获能。    
4.受精及受精的检查  将成热卵子移入培养液的液滴中,加入获能的精子,置CO2培养箱中共同孵育.隔一定时间检查受精情况,如出现精于穿人卵内,精于头部膨大,精子头部和尾部在卵细胞质内存在,第二极体排山,原核形成和正常卵裂等即确定为受精。
   5.体外受精卵{早期胚胎)的培养发育  将受精卵移入培养液中继续培养。由于早期胚胎具有体外发商阻滞现象,因此为克服阻滞期并获得较高的发育率,多采用与卵丘细胞、输卯管上皮细胞等共同培养的方法,以使其发育至桑椹期或囊胚期,然后即可用于移植或其他生物工程的操作
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