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2011-05-09 02:19 |
传染性支气管炎病血清学诊断
传染性支气管炎病血清学诊断
用于抗体检测的方法包括病毒中和试验(VN)、琼脂扩散试验(AGID)、血凝抑制试验(H1)和酶联免疫吸附试验(ELISA)。这些方法在实用性、特异性、敏感性和成本等方面各有优劣。VN试验成本较高，实用性较差；AGID试验缺乏敏感性和特异性；HI试验和ELISA试验虽然在特异性方面也难尽人意，但仍不失为好的血清学方法。ELISA试验已有市售的商品试剂盒．可以按使用说明书操作。
(1)病毒中和试验 在进行VN试验时，首先应将所有的血清经56~C灭菌30min。将病毒和血清在室温下感作30一60min。试验通常采用鸡胚进行，但进行抗体检测也可用TOC或细胞。试验有两种方法，一种为固定血清稀释病毒法(α法)，另一种为固定病毒稀释血清法(β法)。通常采用p法。以鸡胚进行抗体检测的中和试验方法是：将血清作2倍或4借递增稀释，与每0．05ml含100EID。(引起50％的鸡胚感染的病毒滴度)的定量病毒等量混合，以o．01mi经尿囊腔接种于5～Io枚鸡胚，设病毒对照，以确保病毒滴度在101.5-102.5之间。以kaber法或ReedMuench法计算中和效价，抗体滴度以logz的反对数表示。这种固定血清稀释病毒的方法也用于以气管环组织培养进行的中和试验，与其他病毒的常规方法—样．每个血清稀释度接种5个气管环组织培养物，根据ReedMuench法计算结果。病毒靖度以每单位病毒能引起半数气管环纤毛运动停滞的剂量来表示(1log10 CD50)，抗体滴度以log,的反对数表示。本法敏感性优于鸡胚中和试验，但要求较高，限制了推广应用．
(2)微量血凝抑制试验 很多IBV毒株经处理后可凝集鸡红细胞(RBCs)，应根据需要选用不同的抗原。血凝抗原的制备方法是：将含毒尿囊液经30000g离心3h．，沉淀用0．01mol／L，pH 6，5 Tris—HCl缓冲液悬浮，浓缩100倍。加入等量的含1U／ml的1型卵磷脂酶C，置37~C处理2h，即可用作血凝抗原。据报道，以含有卵磷脂酶的产气芽孢杆菌培养液处理IBV比用纯的1型卵磷脂酶C效果更好，最近的研究结果表明，使IBV呈现血凝活性的物质可能是神经氨酸酶。HI程序各不相同，通常使用4～8血凝(HA)单位抗原进行HI试验，基本操作和结果的判断与新城疫的HI没有区别。若鸡群没有免疫过ID疫苗，且有10％以上的鸡血清的度达到51gz以上，说明鸡群已受到IB感染；若检测鸡群的免疫抗体水平，则抗体滴度在(3～5)lg,的鸡群保护率在50％左右，在61g。以上保护率可达100％。采集发病初期和发病期两份血清，血凝抑制效价明显变化者，为IB感染鸡群。
(3)酶联免疫吸附试验 ELISA试验是一种最敏感的血清学方法，反应快，所得的抗体滴度高，但没有型和株的特异性，可用于鸡群免疫后抗体的检测。已有商品试剂盒出售，而且供应商已根据疾病的特点进行了改进，应严格按照说明书使用。
(4)免疫琼脂扩散试验 免疫扩散试验也能用于诊断。其抗原是用感染鸡胚的绒毛尿囊膜匀浆制备的，通常采用鸡胚致死性毒株Beaudette株。试验敏感性较差，而且常常会产生不一致的结果。
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