猪瘟抗体检测两ELISA方法比较-间接法和阻断法
帖子创建时间: 2016年11月28日 15:34 评论：1浏览： 1207 投稿
一、原理是什么？
间接法：
①该方法是检测猪瘟抗体的经典ELISA方法，其原理是在酶标板中包被猪瘟病毒或猪瘟病毒的表面抗原蛋白，加入待检血清同包被的抗原孵育后，加入酶标二抗和底物显色，通过OD值来判定猪瘟抗体的效价。
②如待检血清中有特异性抗体，则形成包被抗原-待检抗体-酶标二抗三种物质的结合物，OD值越高、显色越深、待检抗体含量越高，反之，则待检抗体含量越少。显色深浅与待检抗体量呈正比。
阻断法：
①该方法是基于基因工程和单克隆抗体发展起来的ELISA方法，其原理是在酶标板中包被通过基因工程得到的猪瘟病毒保护性抗原蛋白，然后加入待检血清与包被的抗原孵育，洗板后加入针对包被蛋白的酶标单抗再次孵育，后加入底物显色，通过OD值来判定猪瘟抗体的效价。
②如待检血清中有特异性抗体，则会阻断酶标单抗的反应，导致酶标单抗不会或少量地同抗原蛋白结合；若待检血清中没有特异性抗体，酶标单抗会更好地同抗原蛋白结合。OD值越高，显色越深、待检抗体含量越少，反之，则待检抗体含量越多。显色深浅与待检抗体量呈反比。
二、哪种方法更好？
在农业部颁布的国家动物疫病监测方案中，规定可以采用阻断ELISA或间接ELISA等方法进行猪瘟抗体水平检测。目前，世界动物卫生组织推荐的猪瘟抗体检测方法是ELISA法和荧光抗体中和试验（FVNT）, 其中FVNT可作为猪瘟抗体检测的“金标准”。而中和试验对试验条件和操作人员的要求很高，且耗时长，仅适合专业实验室进行少量样本检测，不宜推广应用。因此，ELISA方法是目前国际上承认的惟一适合大规模应用的血清检测方法。
在进行ELISA检测方法评价时，最重要的两个指标就是敏感性和特异性。阻断ELISA采用了单克隆抗体，因此检测的特异性更高；而间接ELISA则更侧重于敏感性。有研究表明，用OIE推荐的FVNT与上述两种ELISA方法进行符合验证实验，结果表明间接法与FVNT的符合率高于阻断法，间接法能更真实地反映疫苗免疫后的中和抗体水平，而阻断法对阳性样本有漏检情况。
三、如何选择其一？
阻断ELISA方法由于采用的是蛋白纯度很高的单抗，大大提高了检测的特异性，减少了间接ELISA方法的交叉反应和非特异性反应。但该方法实际检测的对象却只是针对单一的抗体，当阳性血清中该抗体含量较少时，会导致检测的敏感性降低。
间接ELISA方法由于采用的是抗原蛋白的多克隆抗体，因此会提高检测的敏感性。但如果包被抗原的特异性或纯化工艺不高，会导致较严重的非特异性反应，影响检测的特异性。
当在进行猪瘟大规模筛查时，需要对某一地区，某一猪群的整体免疫状况进行分析，因此对检测方法的敏感性要求较高；而针对某一规模化猪场来说，尤其是种猪场，不仅要对个体的抗体水平进行检测评价，还要排除其他疫病阳性抗体的干扰，因此对检测方法的特异性要求较高。因此，阻断ELISA和间接ELISA在实际应用过程中，均具有合理性，具有各自的优势和局限。在实际应用过程中，需根据实际情况和检测需求选择一个更为适合的检测方法。
