猪的血液常规检查法
血液常规检查的项目有多种,但是目前用于猪病诊断的项目不多,常用的有血红蛋白含量测定、红细胞计数、白细胞计数等。必须指出的是,血液常规检查仅仅是为临诊诊断提供一些数据,是一种辅助诊断手段,在操作时要严格遵循操作规程和注意事项,力求准确,避免差错,同时应与临诊检查密切结合,才能得到正确的结论。
1.血红蛋白含量测定 健康猪的血红蛋白值为10.5 克/100 毫升(变动范围9.5-12.0,若是血红蛋白的含量增多,见于各种原因引起的血液浓缩,如剧烈的腹泻、呕吐、出大汗及某些中毒病。血红蛋白含量降低,见于仔猪贫血及各种慢性消耗性疾病,如慢性猪瘟、仔猪蛔虫病等。
(1)器械和试剂 ①国产萨利氏血红蛋白计；②0.1摩/ 升(1%－2%)盐酸溶液。
(2)方法 ①于测定管内加入0.1摩/升盐酸溶液至百分数刻度的"20"处(约5－6滴)。②用血红蛋白吸管吸取供检血液至20(或10)立方毫米处,用清洁脱脂棉拭净血红蛋白吸管尖端外壁附着的血液,迅速将血红蛋白吸管插入测定管底部的盐酸溶液中,缓缓压出血液,并以此盐酸溶液反复洗净管内所附着的血液。③以玻棒充分搅拌,使供检血与盐酸溶液充分混合,静置10分钟。④沿管壁向测定管内逐滴加入蒸馆馏水(或N/10盐酸溶液),随加随用玻棒搅拌,并与两侧的标准色柱相比较,直至管内液体的颜色与标准色柱一致为止。⑤ 读取测定管内液体凹面的刻度数,-即100毫升血液中所含血红蛋白的克数或百分数。如被检血的用量只达血红蛋白吸管的刻度"10"处时,将读数加倍。
(3)注意事项 ①吸血量应准确,血红蛋白吸管中的血柱不应混有气泡。②供检血液及稀释液均应沿测定管壁加入, 不能直接冲向管底而产生大量气泡。③搅拌要均匀,防止血液发生凝块。④稀释时蒸馏水应分次、逐滴加入,勿使液体颜色谈于标准色柱而无法比色。⑤混合完毕,应于10分钟后、 30分钟内进行比色。因在室温下,1分钟后约有75%的血红蛋白可与盐酸作用而呈褐色,5分钟后有88%,至10分钟时, 有95%的血红蛋白才能转化为褐色的酸性血红素。
2.红细胞计数 红细胞计数是将一定量供检血经一定倍数稀释后,计算其一定容积内的红细胞数,并换算为每立方毫米血液的含量,健康猪的红细胞数平均值为600万/立方毫米,(变动范围为500 万－700万)。红细胞增多,为血液浓缩,如脱水、出大汗、胸膜炎的渗出期等；红细胞减少,为各类贫血性的疾病或慢性消耗性的疾病。
(1)器材和稀释液 ①血红蛋白吸管,吸血用(与测定血红蛋白通用)。②红细胞计数板,同时也可用于白细胞、血小板计数用。目前一般使用的为鲍氏计数板，上面刻划两个计数室,每个计数室分为9个大方格,每1大方格的面积为1平方毫米,加血后(盖片)的深度为1/10毫米。每个大方格又划分为16个中方格(用于白细胞计数),每个中方格又分为16个小方格,共计400个小方格,用于红细胞计数。③盖玻片、吸管、试管及生理盐水等。
(2)方法 ①取小试管l支,先以普通吸管准确吸取红细胞稀释液4毫升(准确的数量为3.98毫升),置于试管中。② 稀释血液。用血红蛋白吸管吸取供检血样至20立方毫米处, 用于脱脂棉拭去管尖外壁附着的血液,然后将血红蛋白吸管插入已装稀释液的试管底部,缓缓放出血液,再吸取上清液反复洗净沾在吸管内壁上的血液数次,立即振摇试管1－2分钟,使血液与稀释液充分混合,即得200倍的稀释血液。③充液。取清洁干燥的计数板和盖玻片,将盖玻片紧密覆盖于血细胞计数板上,并将血细胞计数板置显微镜台上,用低倍镜先找到计数室,然后用小吸管取已摇匀的稀释血液1滴,使吸管尖端接触盖玻片边缘和计数室空隙处,稀释的血液即可自然引入并充满计数室。④计数。计数室充液后,应静置1－2分钟, 待红细胞分布均匀并下沉后开始计数,计数红细胞用高倍镜, 一般计数中央大方格中四角的4个及中央1个中方格(共计 5个中方格,即为80个小方格)内的红细胞,5个中方格内红细胞的最高数和最低数相差不得超过正负10%,否则表示血液稀释混合不均。红细胞在高倍镜下呈圆形,淡黄色,发亮。为避免重复和遗漏,在计数时应按一定的顺序进行。压在双线上的红细胞都应计算在内，对于压在线上的红细胞,每格都只计入上方和左侧线上的红细胞,而压在下方和右侧的红细胞则均不计入。计算按下列公式进行：
每立方毫米血液内红细胞总数=x/80×400(小方格总数)×稀释倍数×10
x为计数5个中方格(80个小方格)的红细胞数。如血液稀释200倍,为计算方便,也可将计数5个中方格(80个小方格)内的红细胞总数,乘以10000,即得每立方毫米血液内的红细胞总数。
3.白细胞计数 白细胞计数,对某些疾病的辅助诊断有重要的意义。多数细菌性感染和炎症,都能使白细胞增多,如猪丹毒、肺炎、链球菌感染等。而一些病毒性的传染病则能使白细胞减少，如猪瘟、流行性感冒等；某些严重疾病的后期,机体高度衰竭时,亦可见白细胞减少；长期应用某种药物(如氯霉素),也可引起白细胞减少。健康猪白细胞的平均值为 13000个/立方毫米(变动范围为11000－16000个)。
(1)器材和稀释液 器材基本同红细胞计数所用,不同的是稀释液采用1%－3%醋酸溶液(或1%盐酸溶液)。为使白细胞核着色,便于识别,并与红细胞稀释液相区别,可于稀释液中加入1%亚甲蓝或1%结晶紫溶液数滴。
(2)方法 ①取清洁、干燥的小试管1支,以0.5毫升吸管准确吸取白细胞稀释液0.38毫升,放入试管中。②稀释血液。以血红蛋白吸管准确吸取供检血液至20立方毫米处,用干棉球擦去管尖外壁所附的血液,立即将被检血吸入已装稀释液的试管底部,并吸取上清液反复洗净沾在吸管内壁上的血液数次,然后振摇试管1-2分钟,使血液与稀释液充分混合，即可成为20倍稀释的血液。③充液的步骤和操作,同红细胞计数。④计数的方法与红细胞计数相同,但白细胞计数时用低倍显微镜即可,计数四角处4个大方格(每个大方格包括16个中方格)内的白细胞总数。计算按下列公式进行：
每立方毫米血液内白细胞数=x/计数的大方格数×血液稀释倍数(20倍)×10(计数室的深度)
x为计数4个大方格(或计数成对角线的位置上的两个大方格)内的白细胞数。 如血液稀释20倍,并计数4个大方格,则白细胞的总数为x/4×20×10=x×50(个/立方毫米)。
