禽病胶体金快速诊断产品说明|禽病实验室检疫 - 视频兽医网论坛

只看楼主更多操作 0 发表于: 2011-05-28

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石家庄市神九畜禽疾病防治及药物研究所与韩国瑞捷（RAPIGEN）研究所合作并在世界上首次推出新城疫（NDV）+禽流感（AIVH1～15）、禽流感（AIVH1～15）+禽流感（AIVH5）病毒快速诊断试纸。该项目由国际上胶体金方面顶尖科学家朴在九(Jae-Ku Park)医学博士主持，可使鸡场提前5～10天探知瘟疫的侵入，在发病时能迅速判断是新城疫还是流感、是流感时又能分出是否是H5型的，解决了行业内的一大难题，非常适合中国需要。相关产品如下：
1、NDV + AIV（H1～15定性）快速诊断试纸
2、AIV（H1～15定性）+ AIV（ H5分型）快速诊断试纸
3、NDV 快速诊断试纸
4、AIV（H1～15定性）快速诊断试纸
5、AIV（ H5分型）快速诊断试纸
一、产品设计原理
禽用胶体金快速诊断试纸是利用胶体金原理和免疫层析原理来实现捕捉野毒的。
胶体金是俗称金子的金属金的水溶胶。胶体金标记技术是以胶体金作为示踪标志物或显色剂，应用于抗原抗体反应的一种新型免疫标记技术。
免疫层析法 (Immunochromatography)是九十年代兴起的一种基于免疫胶体金技术的快速诊断技术，其原理是将单克隆抗体与胶体金结合，置于聚脂膜中；加样后，如样品中有病毒，则金标抗体与部分病毒结合在毛细现象的作用下向上流动，遇到固定在硝酸纤维膜上的抗体时便生成“金标抗体/抗原/抗体”夹心免疫复合物从而聚集显色（检测线阳性），另一部分没与抗体结合的金标抗体与病毒结合物和随液体向上流动，遇抗抗体时形成“抗抗体/金标抗体/抗原”复合物显色（质控线）；当样本中不含病毒时，则不形成“金标抗体/抗原/抗体”夹心免疫复合物不显色（检测线阴性），但抗抗体与金标抗体复合物仍显色（质控线），从而实现特异性的免疫诊断。该技术与以往常规诊断方法相比具有以下突出优点
•  快速：全部检测过程仅需 5-30分钟。
•  准确：比酶联免疫吸附测定（ELISA其设备5万元）准确度高，与聚合酶扩增技术（PCR其设备百万元）相近。
•  简便：不需其它任何仪器设备，操作也极其简单，可随时随地进行,也不需要专业临检人员操作，而且携带方便，基层可以开展。
•  稳定性好：金标试剂稳定，2~30℃可长期保存。
•  检测标本种类多：泄殖腔内容物、粪便、气管粘液等。

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三、产品参数及使用

1、禽流感病毒（AIV）+新城疫病毒（NDV）联合抗原检测试纸
•检测：所有禽流感含H1~15所有亚型和新城疫病毒（包含大量变异株）。
•检测物：禽类泄殖腔内容物、气管内粘液和粪便
•高敏感度：禽流感养殖场测定100%（3/3），个体测定85.6%(83/97)。新城疫97.5%(39/40)
•高特异性：禽流感99.2%(2/264), 新城疫99.2%(2/264)
•检测低限值: 禽流感0.031血凝单位，新城疫3×10³EID
•检测时间：20～30分钟
•无交叉反应:支气管、法氏囊、支原体和大肠杆菌
•灵巧的收集试管：易于使用且能阻止在病料处理过程中的污染。
•同时精确检测禽流感和新城疫
2、禽流感病毒（AIV）+禽流感病毒（AIV H5）联合抗原检测试纸
•检测：所有禽流感含H1~15所有亚型和禽流感H5亚型
•检测物：禽类泄殖腔内容物、气管内粘液和粪便
•高敏感度：禽流感养殖场测定100%（3/3），个体测定85.6%(83/97)。
禽流感H5养殖场测定100%（3/3），个体测定81.4%(79/97)。
•高特异性：禽流感99.2%(2/243), 禽流感H5亚型99.6%（1/243）
•检测低限值: 禽流感0.031血凝单位，禽流感H50.062血凝单位
•检测时间：20～30分钟
•无交叉反应:新城疫、支气管、法氏囊、支原体和大肠杆菌
•灵巧的收集试管：易于使用且能阻止在病料处理过程中的污染。
•同时精确检测禽流感和禽流感H5亚型

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3、新城疫病毒检测试纸
•检测：新城疫病毒第3页
•检测物：禽类泄殖腔内容物、气管内粘液和粪便
•高敏感度：97.5%(39/40)
•高特异性：99.2%(2/264)
•检测低限值: 3×10³EID
•检测时间：20～30分钟
•无交叉反应:禽流感、支气管、法氏囊、支原体和大肠杆菌
•灵巧的收集试管：易于使用且能阻止在病料处理过程中的污染。
•精确检测新城疫
4、禽流感病毒检测试纸
•检测：所有类型的禽流感 H1~15
•检测物：禽类泄殖腔内容物、气管内粘液和粪便
•高敏感度：禽流感养殖场检测100%(3/3).个体检测86%(86/100)
•高特异性：99.2%(2/243)
•检测低限值: 0.031血凝单位
•检测时间：20～30分钟
•无交叉反应:新城疫、支气管、法氏囊、支原体和大肠杆菌
•灵巧的收集试管：易于使用且能阻止在病料处理过程中的污染。
•精确检测所有类型的禽流感
5、禽流感H5亚型病毒检测试纸
•检测：禽流感 H5亚型
•检测物：禽类泄殖腔内容物、气管内粘液和粪便
•高敏感度：养殖场检测100%(3/3).个体检测80.3%(49/61)
•高特异性：99.2%(2/243)(与RT-PCR对比)
•检测低限值: 0.062血凝单位
•检测时间：20～30分钟
•无交叉反应:新城疫、支气管、法氏囊、支原体、大肠杆菌和其它类型的禽流感
•灵巧的收集试管：易于使用且能阻止在病料处理过程中的污染。
•精确检测所有H5亚型禽流感

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中华兽医

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四、快速诊断试纸的使用方法


一、用棉签在合适的地方（泄殖腔、气管、粪便）取样
   二、将样本插到装有缓冲液的塑料瓶中并加以搅拌
   三、折断棉签（或将棉签拔出同时做无害化处理）拧紧瓶盖用力摇晃
   四、折断瓶盖上的长头，倒转瓶子加样4～5滴到试纸盒中
   五、20～30分钟内观测结果

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中华兽医

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只看该作者 4 发表于: 2011-05-28

五、五种试纸的判定

1、新城疫（ND）试纸条:一条检测线T，一条质控线C。
情况判定：（1）、只有C，没有T。阴性结果，没有捕捉到病毒。
         （2）、既有C，又有T。阳性结果，捕捉到活病毒。
         （3）、无C，试纸失效。
注意：活疫苗免疫后4~5天内不做此检测，此时测出的可能是疫苗毒。此试纸也能测出疫苗是否失效及粗略的病毒含量。
2、禽流感（H1~15）试纸条：一条检测线T，一条质控线C。
情况判定：（1）、只有C，没有T。阴性结果，没有捕捉到病毒。
         （2）、既有C，又有T。阳性结果，捕捉到活病毒。
         （3）、无C，试纸失效。
备注：所有的流感都有一个保守的核衣壳蛋白，此试纸就是去测这个蛋白的。另外，灭活苗的使用不影响试纸的使用。
3、禽流感（H5）试纸条：一条检测线T，一条质控线C。
情况判定：（1）、只有C，没有T。阴性结果，没有捕捉到病毒。
         （2）、既有C，又有T。阳性结果，捕捉到活病毒。
         （3）、无C，试纸失效。
注意：灭活苗的使用不影响试纸的使用，但我国的新城疫—禽流感基因重组苗则有影响，禽流感（H1~15）试纸条测不到（因该苗只有新城疫病毒而无禽流感核衣壳蛋白），但禽流感（H5）试纸条能测到（因该苗新城疫病毒上带有禽流感H5抗原）。此试纸能证明我国这一世界首创的成功，但比例小一些。
4、禽流感（H1~15）+新城疫（ND）试纸：两条检测线， 1为流感2为新城
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疫；一条检测线C。
情况判定：
（1）、只有C，没有检测线1、2，阴性结果，两种病毒都未捕捉到。
（2）、有C，有检测线1而无检测线2，禽流感阳性新城疫阴性。
（3）、有C，有检测线2而无检测线1，新城疫阳性禽流感阴性。
（4）、有C，有检测线1又有检测线2，禽流感阳性新城疫阳性。
（5）、无C，试纸条无效。
注意：我国的新城疫—流感H5重组苗在测定时只显新城疫而不显流感。另外相关灭活苗的使用不影响试纸的使用。
   5、禽流感（H1~15）+禽流感（H5）试纸：两条检测线，1是流感（H5）、2是禽流感（H1~15）。
情况判定：
（1）、只有C，没有检测线1、2，阴性结果，两种病毒都未捕捉到。
（2）、有C，有检测线2而无检测线1，禽流感阳性禽流感H5阴性。（有禽流感野毒但没有禽流感H5，可能是H9等）
（3）、有C，有检测线2和检测线1，禽流感阳性且禽流感H5阳性。（有禽流感且有禽流感H5，如只有一种病毒，则该病毒为H5亚型禽流感）
（4）、无C，试纸条无效。
注意：我国的新城疫—流感H5重组苗在测定时只显H5亚型流感不显禽流感。另外相关灭活苗的使用不影响试纸的使用。
                  六、试纸使用及贮藏注意事项
一、只用于兽医诊断。
二、一次性用品，不重复使用。
   三、避潮，包装袋打开后迅速封闭；袋破或封口不严，发现后应不再使用。
   四、注意自身保护，使用手套、防护服等。
   五、应完全使用配套用具，因试纸非常灵敏，避免器具污染影响结果。已有几次此类事例。用后相关器具应做消毒灭菌处理，以免再污染。
   六、试纸测定虽然很灵敏，但也只是诊断手段之一，测试结果仍应与其它诊断方法和临床相结合，并与发病史相联系。以做全面考虑。

七、胶体金快速诊断试纸使用技巧

1、  一个试纸原设计是测一只鸡，实际应用中可以一条测4~8只家禽，就是自己要准备一些消过毒的棉签。这样既能扩大采样增加了准确度，又能大幅降低使用成本。我们已经进行了上千次实验，完全可行。就是要注意，多用棉签时，要将棉签上的水挤一下，留在稀释瓶中。用了几个棉签，别让它们把稀释液给沾完了。如果采得样本中尿酸盐过多，尿酸盐会铺在聚脂膜上使水渗不下去，金标会不流，这时要迅速用棉签的硬端在滴孔的水里搅几下，让样本液渗下去。
2、一般加液4滴就够，不要少加或多加，加少了，金标有时会跑不到头，加多了，金标会飘浮，跑得就慢了。同时要注意试纸条要平放。
3、要让金标跑完后再下结论，不要半途下结论。
4、检测线上的显示病毒的颜色与病毒的量成正比，色越深病毒越多，越浅
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病毒越少。在实际生产中先测得病毒多检测线色深，以后通过做苗抗体上来后，再测病毒少了，检测线色浅，如做苗的效果好，最后会测不到病毒，在检测线上就不出现色了。试纸的作用不光在于有病时能迅速测到病毒，而是在症状不现时就能测到病毒，从而能早期防病的发展。减少损失。
5、稀释液之间配方略有不同，可以混用，但尽量专用。
6、本品在2~30℃保存，禁止冷冻！
编译：刘会芳（世界禽病学会会员韩国捷瑞捷生命科学研究所研究员、神九研究所所长）刘军同  (神九研究所研究员.韩国捷瑞捷生命科学研究所研究员）部分技术细节由韩国RapiGen研究所所长兼RapiGen株式会社社长朴在九（Jae-Ku Park）医学博士提供，特此致谢！