来源:北京康牧技术部
近年来，我国家禽规模化、集约化和标准化饲养发展迅速，而传统的农村散养模式所占比例越来越少，这是我国养禽业向现代化健康稳定发展的大趋势。在集约化养鸡企业的兽医卫生和疾病防控工作中，实验室检测的作用日益突出，有规模的种鸡场或商品鸡场，在科学免疫的同时，都应定期对鸡群进行免疫监测，这是鸡场生产成功的重要保障。
1 病原
新城疫（ND）是由禽副流感病毒Ⅰ型新城疫病毒（NDV）引起的一种主要侵害鸡、火鸡、野禽及观赏鸟类的高度接触传染性、致死性疾病。NDV对鸡的感染率和致死率均颇高，是最重要的一种家禽传染病。NDV不易变异，只有一个血清型，属于副粘病毒科副粘病毒属的Ⅰ型副粘病毒（PMV-Ⅰ），病毒有囊膜，囊膜有两种纤突，即血凝素和神经氨酸酶，能凝集多种动物的红细胞。
尽管已有不少的实验室方法可用于ND的血清学诊断，例如，病毒中和试验、ELISA试验、琼脂双扩散试验、神经氨酸酶抑制试验等。但迄今为止，血凝试验（HA）和血凝抑制试验（HI）仍不失为一种快速准确的传统实验室手段。
2 实验材料
2.1 参考血清
实验中的NDV阳性参考血清可用6~9周龄的SPF鸡制造。腿部肌肉注射0.1ml具感染性的低毒力尿囊液，同时滴鼻0.1ml，两周后重复一次，再过3周以后采血提取阳性血清。
2.2 抗原
ND-HI抗原是采用经适当稀释的具有感染性的尿囊液，在实际工作中常用0.1%甲醛灭活的病毒液。F株已被指定为NDV的国际参考株，但通常多用LaSota株代替比较方便。根据经验，LaSota血凝抗原HA效价以＞10log2为佳。目前青岛易邦、中检所和哈兽研均有商品化试剂出售。
2.3 1%红细胞液
应自SPF或无抗体鸡采得。采用翅静脉或心脏采血后放入有抗凝剂的离心管中，混匀后2000r/min，5~10min，吸去上清和白细胞膜，再加稀释液洗涤，如此反复3~4次，将最后一次离心的红细胞泥按1%的稀释度加入稀释液。
3 方法
HA和HI试验已推广β-微量法，在96孔反应板上进行。目前，常见样品反应量为25、30和50微升，其结果基本无差异。对所有副粘病毒的各血清型，未免疫或未被感染的禽，其HI效价通常低于1:8。大多数禽血清，高于这个水平的非特异性效价是极少见的。
4 影响结果的因素
4.1 红细胞悬液浓度
来源于不同个体鸡的红细胞，对抗原的敏感性不尽相同。因此实验时最好用3~4只未免疫鸡。
4.2 抗原的稀释倍数
配制抗原时，浓度必须准确。当抗原浓度高时， HI抗体效价就下降；当抗原浓度低时，HI抗体效价就上升。
4.3 实验用的稀释液
稀释液的pH值对实验有影响。稀释液的pH值5.8以下，红细胞容易产生自凝现象；pH值在7.8以上凝集图形易消失，也会造成实验误差。而pH值为7.0时，红细胞沉降最充分，图形最清晰，HI效价也最高，因此实验时用pH7.0~7.2的稀释液。目前多用磷酸缓冲液（PBS）。
4.4 实验时的温度
实验时的温度，从4~37℃，随着温度上升，HA与HI滴度提高，但在37℃时，凝集的红细胞易洗脱；4℃以下红细胞易产生自凝，故操作常用20~22℃。
4.5 实验的作用时间
一般以30~45min为宜，CP集团统一为30min。
4.6 其他
人为因素、操作程序因素、器具的洁净与否等都会对检测结果有影响。不同实验室间对于同一批次样品的检测数据不宜做横向比较，但对同一鸡场样品的检测结果的纵向趋势应相似。
5 检测频率及采样数量
对于健康鸡群可每四周检测一次，对于发病的鸡群，可采集发病后7~10天的样品进行检测。可以按每个舍0.6%的比例采样，但每舍不得少于15份，常规采样20~30份即可。
6 检测时机
6.1 1d ：检测母源抗体，考察种代健康情况及确定免疫时间。
6.2 肉鸡：35~42日龄，测定出栏前机体抗体情况。
6.3 种鸡/蛋鸡：每4周一次。
6.4 免疫试验或疫苗对比试验：每周采血化验。
7 采样的具体要求
采样应注意样品数量与质量，既保证时间连续性，又要兼顾阶段连续性。
7.1 每个鸡舍应分至少五个点随机采样。采血的量要适当，一般在1~1.2ml左右(4/5管)为宜。如果采血量不足，可能不够完成所有的化验项目。
7.2 采血时采出的血液应沿着采血管管壁慢慢注入管内，切忌用力过猛起泡造成溶血。
7.3 刚采好的血要避免受冷和振动，应在25~37℃环境中加盖静置1~2h，这样有利于血液凝固和析出血清。静置后立即送检，如不能及时送检。须放入4℃冰箱保存（不要超过24h），切忌冰冻。
7.4 血样运输时尽可能直立，避免洒漏。
8 采样方法
8.1 心脏采血（适用于刚出壳到两周内的小鸡）
一般用前胸口进针采血，具体方法：用左手固定使鸡仰卧,胸骨嵴朝上，用手指将嗉囊及其内容物压离局部,暴露出胸前口，将针头由前胸口顺着体中线水平方向刺入,直至穿进心脏。若针头在心脏中，抽拉注射器管芯可将血液吸入,若未见血液吸入针管中，可小心地前后移动注射器和针头,直到刺入心脏为止。切忌左右乱扎，导致小鸡大出血死亡。
8.2 翅静脉采血
固定鸡后,展开翅膀在翅下选一条粗大静脉，用碘酒和酒精消毒，以手指压迫静脉的回心端，使静脉怒张，然后用注射器刺入血管，发现血液回流时，用注射器抽取血液。采完后拔出针头，压住进针处止血，再将血液沿管壁慢慢注入采血管内，静置使血液凝固。
9 如何评价ND-HI
9.1 正常鸡群
9.1.1 母源抗体半衰期为4.5天（HI），出壳后5日龄内HI滴度有所升高，然后下降。
9.1.2 商品肉鸡母抗≤26，有时可达29，一般情况下母抗较种代鸡低2个滴度。
9.1.3 种鸡/蛋鸡2个月时可达26~8 ，甚至更高，多次免疫也不会超过212。
9.1.4 通常一旦建立免疫保护，HI抗体维持2个月无大变动，抗体波动不会超过2个滴度。
9.1.5 正常情况下，油苗免疫一次可以提升1.5~2个滴度，否则就是免疫失败，应尽快从鸡群健康状况、疫苗质量、免疫方法等多方面寻找原因，设法补救。
9.1.6 免疫鸡群血清ND-HI抗体水平与保护力的关系
（ND免疫临界值和产蛋安全免疫临界值）
ND-HI滴度 鸡群接触到vvNDV后的情况 备注
<4Log2 死亡临界值。50%以上的死亡率，可达100%。 免疫抗体
4-7Log2 90%以上的保护率。
>6Log2 能抵抗呼吸道感染,仍有少数鸡死亡。
8Log2 100%保护，但产蛋鸡群产蛋下降。
9-10Log2 产蛋安全临界值。
11-13Log2 NDV仍可在鸡体内复制。
>13Log2 不再出现NDV复制（不发生感染） 强毒感染后的抗体
9.2 发病鸡群
9.2.1 发病后2w的ND-HI至少比发病前高2个滴度，个别可能异常高。
9.2.2 肉鸡或育雏的种鸡/蛋鸡发病后10d，ND-HI可上升5个滴度到210 。
9.2.3 种鸡/蛋鸡场野毒感染1个月后，个别的滴度可达214或更高。
9.2.4 生物安全措施良好的鸡场往往存在野毒的滚动感染，因此鸡场的病程往往持续数月之久。如确诊的早，可从远离发病舍的（假定）健康鸡舍做紧急免疫。
需要认识到，常规血清学检测的结果仅代表鸡群的体液抗体（循环抗体IgG）水平，而ND活苗免疫后产生局部免疫力的分泌型抗体IgA和IgM不能被常规方法检测出来。因此用HI结果来评价其抗体水平的高低有一定的局限性。另外，HI抗体虽然与病毒的中和抗体呈正相关，但不能等同。尤其是生产后期，鸡群HI滴度有时偏低，但对NDV的实际抵抗力往往尚高。相反地，有时HI效价很高，却仍然会发生NDV感染。因此，紧密结合鸡群的临床情况来分析检测结果才能帮助我们做出正确判断并及时发现和解决生产中的问题。
