英国使用疫苗接种预防沙门氏菌的经验
沙门氏菌是一种典型的肠道生物体，在大多数家禽感染的病例中不表现临床症状。在这种情况下，由于人工方法刺激局部肠道产生免疫力困难，通过按种疫苗产生的潜在好处能够被人们认识。在实践中，接种疫苗，是全面管理、卫生和生物安全措施的一部分，从两方面来说，对降低感染水平都有有价值的作用。这两方面是：一是从单个鸡群或鸡场中根除感染；二是在不可能根除感染的地方，减少鸡群内的流行、排泄、鸡场环境污染和来自于鸡场的食用产品的污染。在历史上，沙门氏菌活疫苗和灭活疫苗都曾经被用于牛和猪。例如，都柏林S1株沙门氏菌粗糙型变异株活疫苗，在20世纪曾被用于控制牛的都柏林沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌(sT)；猪霍乱沙门氏菌疫苗，曾被用于控制猪的临床沙门氏菌病。有趣的是，猪霍乱沙门氏菌，实际上在包括英国在内的几个国家的养猪生产中自然地消失了。含佐剂的灭活的来自生产场检出的沙门氏菌病原体制备的自家苗或“紧急畜群疫苗”也曾经在英国和美国使用，但缺乏关于这些疫苗效力的可靠数据。专用于某个动物种的商品化疫苗，也曾经被用于其它动物种。例如，用于牛的鼠伤寒／都柏林沙门氏菌病二联灭活疫苗，曾经被用于猪和家禽(特别是火鸡和鸭)，但根据听到的证据，表明其作用似乎相当有限。相似的情况还有，现有的用于家禽的鼠伤寒沙门氏菌病活疫苗，已经在少数试验中被用于育肥猪，得出的结果含糊不清。在英国一直使用接种疫苗方法控制沙门氏菌，主要是针对家禽(特别是鸡)生产中的肠炎沙门氏菌(sE)的控制以及最近ST的控制，因此，这篇文章和相关报告关注的是这个方面的问题。
一、sE问题的背景
SE是1888年首先在德国被鉴定的，当时有一头母牛被感染，有一个人因食用该母牛的肉而导致死亡。1937年，有200个士兵在食用来自感染母牛的肉之后发病。在1958年至1967年，分离到的SE菌株占总体沙门氏菌分离物的比例是人为3．3％，家禽为1．6％，牛为0．5％。在1968年至1973年，家禽的这一比例增加到9％，但到1974年至1983年，下降到1．2％，与人类非预期的问题不相关。在1981年至1986年，流行率增加，家禽SE的分离比例达到2．2％，而在1984年，根本就没有分离到SE。在1985／1986年，人类的SE(特别是噬菌体4型／PT4)的比例快速增加，到1988年时，分离自家禽的沙门氏菌中，SE的比例占50％。这使得许多人类SE疾病的暴发与污染的鸡蛋有关的结论变得很清楚。当时，首席医务官发布了要小心使用生鸡蛋和未煮熟的鸡蛋的警告。作为回应，兽医当局在1989年引入了《家禽产蛋群和家禽育种群以及孵化场指令》。在指令中特别说明了针对群体的检测程序和针对感染群的屠宰策略。检测程序证实了肉种鸡和蛋种鸡以及商品蛋鸡都有感染存在，屠宰了许多鸡群。在相当短的时间内全世界出现的特定PT4、PT6和PT8型SE的来源提示，一般的来源，如育种群，可能是在饲料受到污染之后才出现的。有些证据表明，通过种鸡群的贸易，导致了SE感染国际性的散布。火鸡从未像鸡那种程度的感染，而鸭保持以PT9为主的SE噬菌体型的混合性感染。
一些肉种鸡公司，经历了多个鸡群被感染和种鸡群与孵化厅之间循环感染的严重问题。在种蛋孵化期间，由于污染严重，整个建筑被污染，常规清洁和消毒不能加以控制。特别是所使用的消毒剂的种类和浓度经常不合适，在一些病例中，消毒的结果不是减少了沙门氏菌，而是促进了沙门氏菌的增殖。这种情况特别容易出现在蛋盘冲洗机中。来自感染鸡蛋的蛋盘的污染，被传播给其它用于鸡场收集种蛋和储存鸡蛋的蛋盘。相似的情况还有，用于鸡场收集鸡蛋的车，经常在孵化厅被污染，并将污染携带回到种鸡场。一旦认识到这种污染问题，大多数公司就改进了孵化步骤，对进入孵化厅的鸡蛋和蛋盘进行熏蒸消毒，包括分开蛋盘冲洗机针对不同类型的蛋盘进行冲洗和出雏期间的福尔马林蒸气消毒。这样，多年龄父母代鸡群存在的鸡场的持续感染就成了问题，因此，孵化厅仍然继续被感染鸡蛋所污染。这些感染的鸡蛋在储存、运输或者孵化期问都构成了污染。幸运的是，还没有出现过SE常在的孵化厅污染的情况，因为，SE似乎不能长期在孵化厅的设备中定植。对肉鸡父母代鸡场的调查再次证明，清洁和消毒标准有时是不足的。在包括使用过氧制剂、氯制剂和季氨盐／戊二醛消毒剂的特定程序中，经常不能够处理好表面污染以及残留有机物的菌膜，消毒剂的浓度常常不足以达到消除细菌污染的浓度，因为农场主较常使用杀灭病毒的消毒剂浓度(杀灭病毒较为容易)。许多鸡场还存在老鼠的问题，因为在一些小坑道中聚集大量的老鼠，难以通过投喂饵料诱捕。隔热层和舍内储存垫料的区域以及附属料斗区域，也给这些啮齿动物提供了安全的庇护所。这些啮齿动物在相当短时间的换群(空舍)期间负责携带高水平的沙门氏菌，因为单个的老鼠能够保持全身性感染达数月或数年。蛋种鸡群和孵化厅的这种情况还不清楚，因为能够进入这些场所的机会较为有限，但是，据调查证实所发现的问题与在肉种鸡场发现的问题相似。但是，清理蛋鸡父母代鸡舍似乎较为容易，因为这些鸡舍的设计较易清理，而且牵涉的公司数量较少。
二、接种疫苗之前在育种群采取的法定行动
1989年发布((人畜共患病指令))，要求向主管当局报告沙门氏菌分离物。那时就已经能够强制扑杀鸡群，并按照《动物保健法案1981))进行补偿。同年又发布了《家禽育种群和孵化场指令》，要求育种群和孵化场进行登记，定期采样检测沙门氏菌，并扑杀发现的且得到官方证实的被SE或ST感染的鸡群。针对商品蛋鸡群相似的立法(《家禽产蛋群指令1989)))被发布，因为人们认识到污染的鸡蛋给消费者带来了主要的风险。对于产蛋鸡群，要在培育期和生产期定期进行沙门氏菌检测并扑杀感染鸡群。1993年，《产蛋群指令》被取消，《家禽育种群和孵化场指令》被修改，移除了法定要求针对家禽而不是鸡的检测内容，尽管这些检测内容能够基于自愿继续进行并能收到检测成本的帮助。此时，英国接受了来自欧共体(EU)的配发，代替扑杀感染肉种鸡群的是可以投药治疗沙门氏菌感染而不扑杀，因为大量扑杀感染鸡群引起了行业严重的财政和物流问题。基于在荷兰所做的工作，证实用氟喹诺酮类药物和竞争性排斥产品治疗后感染有明显减少，英国采纳了这种针对育种群的方法，尽管在实践中这样做经常不成功，而且有些鸡群在二次检测证实为阳性后不得不扑杀。这种方法最后被批准使用，是在1997年的一个感染鸡群中。1999年，在引入疫苗接种方法，感染鸡群的发生数量已经降低到能够使用扑杀方法处理的水平之后，这种方法被废止。
三、通过接种疫苗控制父母代种鸡群sE的感染
在20世纪80年代，政府的研究(机构)被委托针对用于家禽控制SE的活疫苗和灭活疫苗两者开发情况进行调查。一种油佐剂灭活菌苗在威布里治(Weybridge)被生产出来，对抵抗定植有良好但不全面的保护作用，在进行大量静脉内攻毒后，能明显减少全身感染。与此同时，针对SE和ST的限定的Aro-单和双缺失突变疫苗也在威布里治被生产出来，效果也很好。这些活疫苗和灭活疫苗的商业权限被一个制药公司购买。该公司通过在限制离子、降低温度的条件下进行增殖，提高抗原的生产，并为操作安全添加了铝胶佐剂，进一步开发灭活疫苗。这种疫苗田间试验的结果非常好，并在1994年首次进行商业化推广，当时肉种鸡业大量使用这种疫苗进行接种。在蛋种鸡业则没有得到广泛应用，因为在那时，血清学监测方法的使用已经作为鉴别感染的敏感方法得到很好地建立，能够通过不同的管理程序进行控制，并通过在感染鸡群淘汰后足够长时间的空舍期良好的消毒和啮齿动物控制，而将感染从鸡场中根除。灭活疫苗可产生高水平抗体，干扰血清学监测结果。
进行疫苗接种后，对肉种鸡群沙门氏菌感染水平的影响非常明显。培育期接种疫苗的肉种鸡群效果非常明显，很少有鸡群表现携带感染的情况，这些鸡群是饲养在啮齿动物问题严重的鸡场。由于少数鸡场有啮齿动物而flail生条件差，存在携带感染的问题，这些少数鸡场在接下来的鸡群循环期间有SE出现，但在商品肉鸡场沙门氏菌减少方面得到改善的效果也能够看到。
人们认为，用灭活疫苗免疫后，与卵黄和雏鸡中高水平沙门氏菌抗体有关的母源免疫力，可以帮助清除英国肉鸡群的SE。实验证明，母源免疫力有一些保护作用，但在田间的作用是不确定的。在引入疫苗接种后，很少有鸡群发生SE感染，而且发生的感染通常与疫苗接种彻底失败有关。肉鸡继续有低水平的感染，但这常常与进口种蛋和后来孵化厅的交叉感染有关。自从这种行为被广泛阻止以来，肉鸡中的SE非常少见，而且在一些年份根本没有病例报告，尽管针对肉鸡的良好行业监测程序证实大量病例与“外来的”血清型有关。人们认为，与肉鸡的SE大量减少有关的另一个因素，是取消了使用药物治疗种鸡群的方法。因为这种药物治疗的方法可以导致低水平沙门氏菌从感染群携带到孵化厅。
尽管接种疫苗的方法从来没有常规性地用于蛋用父母代鸡群，但它已经被反应性地用于那些要饲养在发生过问题鸡场的鸡群。这是一种非常成功的方法，在蛋鸡父母代鸡群中，还没有连续感染的范例。
四、商品蛋鸡群的免疫
在种鸡群中引入针对SE和ST的控制程序后，最初认为，与肉鸡的情况一样，感染在商品蛋鸡群的流行是卫生和鸡群更替的结果，会随着时间．的推移自然地下降。1995-1996年，进行的国内鸡蛋调查结果显示，6个鸡蛋混合样品的0．85％为SE阳性，与预先在1991年进行的调查结果比较是增加了。1993-1995年，在最初人类病例减少之后，感染也开始增加，在1997年再次达到一个高峰。由于1993年对商品蛋鸡群的控制从法定控制中删除，很少进行细菌学监测，但主要的零售商和关键供应商开始进行一些血清学监测，结果表明存在严重问题的可能性。由于公共卫生和市场关注的原因，英国蛋业协会(BEIC)发布了《狮标操作守则》、要求其成员对鸡群进行免疫控制SE，并且在饲养期和空舍期进行监测。温度和卫生控制也被引入蛋的处理和保存，“此日期前食用”的日期被应用于鸡蛋。到1997-1998年，大量的英国蛋用鸡群已经接种疫苗预防SE，人类感染的比例开始明显下降，直到2001年，由于鸡蛋进口(特别是从西班牙进口)，噬菌体型(不是PT4型)开始增加。这些SE菌株通常对萘啶酸(和／或对其他抗菌素)有抗性，这种抗性在国内分离物中是非常少见的。
尽管BEIC成员被要求针对沙门氏菌接种疫苗，这包括大多数主要的生产者，****的农场，他们中的一些代表英国鸡蛋生产零售协会(UKEPRA)，接受了另一种途径，即在从培育场到产蛋场的转运中应用竞争性排斥方法处理鸡只。这种想法帮助预防更大范围的沙门氏菌血清型，但是对于此方法在蛋鸡群中使用的证据很少。大约20％的鸡根本没有免疫，这些鸡通常供给当地的贸易者、宴会负责人或者直接在农场销售。
五、活疫苗的引入
在2000-2001年，新的SE以及后来的ST代谢漂移突变株活疫苗和SE／ST二联灭活疫苗开始推广。在养禽业存在关于不同疫苗和联苗的许多争论。特别是开放式生产者被鼓励使用联合产品，因为他们被认为存在野生动物ST引入的较大风险。基于血清学监测，也有一些关于笼养蛋鸡中未鉴定ST的可能性的推断。但达成的共识是，对SE的主要威胁有最佳保护力是最重要的，ST疫苗要用在存在已知风险的地方。在2002-2003年间，又一些活疫苗被应用，包括对SE有一些交叉保护的鸡伤寒沙门氏菌粗糙型突变株疫苗和SE PT4营养型缺陷型突变株疫苗。这些疫苗直到最近才被更好地得到理解，因为它们具有潜在的优势——能够以两羽份给予而不是3羽份给予。关于选用不同的灭活疫苗和活疫苗相应的效力在田间没有结论性的证据，但后者(活疫苗)的主要优势是使用方便，因为喷雾方法也可以使用，但通常是在培育期经饮水途径使用。鸡伤寒沙门氏菌9R疫苗的第二次免疫通常是在转移到产蛋场时注射。鸡伤寒沙门氏菌9R疫苗最近由于供应商问题已经被从常规使用中删除。活疫苗饮水使用的实用性已经导致大量鸡场针对SE进行疫苗接种。由于ST代谢漂移突变株疫苗被制造商以最少的成本供应，最近ST疫苗也被大量使用。
一些生产者也在给雏鸡在转移到产蛋场时使用竞争性排斥产品，因为这已经被证明在用疫苗时可以提供额外的作用。研究和监测的证据说明，接种疫苗对污染产蛋鸡场有利，可以减少群体流行率、排泄、环境污染和鸡蛋的污染。但在许多病例中，特别是在多年龄鸡群存在的鸡场，有关鸡场内临近鸡舍中的连续感染和由啮齿动物以及苍蝇的携带者的挑战，淹没了由疫苗提供的保护力，尽管接种了疫苗，新进场的鸡群也被感染。因此，拥有良好的鸡场卫生、有害物控制和理想的整个鸡场的全进全出策略，结合疫苗接种是至关重要的。
六、其他家禽品种的免疫
对有问题的育种场的火鸡和鸭，已经进行了一些SE和ST的免疫。根据来自业内的证据，最初牛的ST疫苗在鸭的使用，似乎作用有限。活的和灭活性的ST及SE疫苗在种鸭场连续的联合使用，已经成功地根除了ST，但SE没有被根除。对于种用火鸡和商品代火鸡，更多的信息有赖于ST疫苗的使用，特别是疫苗刺激产生母源免疫力的作用，提高了放入持续污染的育雏场的商品代火鸡的保护力。
七、使用疫苗的问题
考虑接种疫苗的效力时，在明显疫苗接种失败中，要评定不正确的或不完全的使用效果总是很难。在注射接种疫苗的事例中，即使已知细心地做了工作，仍然会有由于注射部位错误或多重注射策略问题引起少量的失败比率。当需要快速接种大量的鸡只，多只鸡要被抓取时，准确把握注射部位困难，接种疫苗者在压力下可能感觉到要快速完成工作，因此，可能较不注意注射的准确性，错过正确的肌肉内注射位置。可能没注意到速度太快，接种枪打出的剂量不足或者已经离开疫苗。理论上，在饮水中使用活疫苗应该可以避免这样的问题。但是也需要特别细心，以确保疫苗接种剂量正确。水线必须有效地排空和准备好，特别是在大型笼养鸡舍中有多条水线的情况下，这些工作是不容易做好的。第一羽份疫苗应该在一日龄时给予，此时疫苗摄取最多。但在实际中，雏鸡不会喝太多的水，因此许多疫苗被浪费，生产者经常推迟或者较晚地进行免疫。在水中可能存在抑制性物质或细菌污染，这些物质会降低疫苗的存活率，通常需要综合推算，以确保所使用的疫苗浓度合适，在2～3h内疫苗水平降低前，被鸡舍中的所有鸡摄取。如果这个程序执行不正确，许多疫苗就被浪费掉。假定后来也有一些活疫苗从有效时间内摄取疫苗的鸡传播给其它鸡，但这种情况是可变的，依赖于最终摄取的疫苗剂量和疫苗菌株在水线中、鸡体内和环境中的稳定性。这里存在矛盾，因为认证机构要求活疫苗是有最短的存活时间，而较长的存活时间很可能会更好地使鸡接触到疫苗。一些活疫苗被放在脱脂奶或带颜色的保护剂中使用，以降低其在水线中的死亡率，通过检查鸡口腔中染料的存在情况证实摄取情况。
八、免疫鸡与感染鸡的鉴别
注射用疫苗会产生强烈的抗体应答，因而可以干扰血清学监测。鸡伤寒沙门氏菌(sG)9R疫苗没有刺激产生鞭毛抗体。因此，最初的筛查，可以用一种敏感的基于脂多糖的ELISA方法进行，阳性结果的确认用一种检测鞭毛抗体的ELISA方法进行。
活疫苗可以从免疫鸡群中分离出来，如果不对疫苗进行鉴定会导致错误的行动，一些疫苗在某些培养基(如MSRV)上不生长，因此，在这些培养基被使用时，疫苗菌株不可能被分
离出来。一些疫苗似乎在有颜色的培养基上生长不典型。因此，这可以提供很可能是疫苗菌株的主要缺陷，但一些野株菌也会表现出不典型的情况。代谢漂移突变疫苗有抗生素抗性标志，能够通过对利福平和对红霉素的临界敏感性进行鉴定。鼠伤寒疫苗也有一种罕见的噬菌体型。营养缺陷型SE疫苗，能够通过在最低营养水平的培养基(有和没有特定氨基酸、腺嘌呤、组氨酸)上的生长情况进行鉴定，而且基因型不常见。SG 9R疫苗可以非常容易地通过血清型和生化试验与SE进行鉴别。但较难与SG野菌株进行鉴别，现有的吖啶黄凝集试验似乎是唯一可靠的试验，尽管它可能对粗糙的野菌株会产生相似的反应。在英国，所有的SE菌株和所有的ST DT9菌株被针对活疫苗进行日常的筛查，并添加到监测成本中。一些SE疫苗菌株已经被发现，主要是来自最近免疫鸡的尸体解剖组织，或者最近处理过活疫苗的鸡场员工采集样品的交叉感染。最近的一次SG病例的暴发情况显示，在用了SG 9R疫苗的一个鸡场中，野菌株和疫苗菌株两者都在免疫鸡中被发现(在鸡尸体中发现了，但在环境样品中没有发现)。
九、结论
针对SE的疫苗接种，已经是英国沙门氏菌控制程序的重要组成部分。在肉鸡育种和生产中取得了极大的成功，以致肉种鸡和商品肉鸡后天性感染病例现在极其少见。商品种鸡的疫苗接种，在减少消费者通过污染的鸡蛋感染的风险中是有益的，但需要做更多的工作以阻断有问题的多年龄的鸡场的感染循环，因为多年龄鸡场存在持续的环境污染。也需要做更多的分子流行病学工作，以评估英国国产和进口蛋、禽肉、旅游和二次传播对人类沙门氏菌病例的现行影响。
转载《中国禽病网》
