猪弓形虫病的诊断方法

来源： 《集约化猪场实用驱虫技术手册》  
    猪弓形虫病的临床症状、剖检病理变化与猪瘟、猪肺疫等疾病较为相似，容易误诊，因引，确诊猪弓形虫病往往需要采用病原学检查和血清学诊断。
    一、病原学检查
     1.组织器官的涂片检查 取病死猪的肺、肝、淋巴结、腹水等病料做涂片，自然干燥后，甲醇固定，用姬姆萨氏染色液染色后，置高倍显微镜（油镜）下观察。发现弓形虫速殖子（滋养体）、假包囊等虫体即可确诊。上述各种病料中以肺脏涂片的背景最清晰，最容易发现虫体，因而检出率较高。此法操作简便，适合于急性暴发性病例的诊断。
     2.动物接种 在病猪的弓形虫虫体数量较少，用组织器官直接涂片难以检到虫体时，可利用小白鼠、家兔等对弓形虫高度敏感的特点，进行动物接种，待虫体增殖后再行涂片检查。具体操作方法如下：取病猪的肺、肝、淋巴结等研碎，加10倍生理盐水，并于每毫升混悬液中加庆大霉素2000单位，在室温下放置1小时。接种前振荡，待重颗粒沉底后，取上清液接种于小白鼠的腹腔，每只接种0.5～1.0毫升。接种后观察数天，若小白鼠出现被毛粗乱、呼吸迫促的症状或死亡，取腹腔液或脏器作涂片染色镜检，发现弓形虫的速殖子而确诊。有时，初代接种的小白鼠由于虫体数量较少，可能不发病。此时，可于接种后第5天，扑杀小白鼠，取其肝、淋巴结等组织按上述方法制成混悬液盲传3代，如果最终可从病鼠腹腔液中发现弓形虫的速殖子，即可确诊；如果仍然查不到虫体，则判被检材料为阴性。
    二、血清学诊断
      国内外已研究出多种血清学诊断法供流行病学调查和生前诊断用。由于血清学阳性只能说明该猪过去某时曾受感染，因此，为了弄清是否急性感染，需在第一次采血检查后的2～4周再采血检查一次，若血清抗体滴度高于先前4～8倍，即可证明为急性感染。也有报道认为染色试验（DT）的滴度超过或等于1∶1000时，表明是弓形虫急性感染。
染色试验（DT） 这是弓形虫特有的血清学诊断法，特异性高而且被认为是标准的诊断方法。其原理是新鲜的弓形虫易被美蓝着色，然而当加入含有辅助因子(AF)的新鲜正常人血清时，促使抗体与细胞浆发生作用而引起细胞浆变性，变性的虫体胞浆不能被碱性美蓝着色。利用这种现象可间接地测定感染弓形虫后体内抗体的含量，以此作为本病的生前诊断。通常猪感染弓形虫后3～5天就可见到抗体滴度的升高。
      此外，还有间接血凝试验、酶联免疫吸附试验、补体结合反应等血清学诊断方法用于弓形虫病的流行病学调查。但是，目前国产的弓形虫病诊断试剂盒普遍存在较高的假阳性，各种诊断试剂盒之间符合率较低等问题，有待进一步完善和提高。

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