1.美蓝染色法 在已干燥、固定好的抹片上,滴加适量的美蓝染色液,经1—2min,水洗,沥去多余的水分,吸干或烘干,镜检。 <DeKs?v
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2.革兰氏染色法 wovmy{K
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(1)在已干燥、固定好的抹片上,滴加草酸铵结晶紫染色液,经1—2min,水洗。 0^GbpSW{
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(2)加革兰氏碘溶液于抹片上媒染,作用1—3min,水洗。 Y{k>*: Ax_
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(3)加95%酒精于抹片上脱色,约30s---1min,水洗。 0$eyT-:d
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(4)加碱性复红液(或沙黄或稀释石炭酸复红液)复染10---30s,水洗。 lQV|U;~D
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(5)吸干或烘干,镜检。革兰氏阳性菌呈蓝紫色,革兰氏阴性菌呈红色。 hD nM+4D
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3.抗酸性染色法 xT9Yes&
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(1)在已干燥、固定好的抹片上,滴加较多量的石炭酸复红染色液,在玻片下以酒精灯火焰缓缓加热,至发生蒸汽即止,维持微微发生蒸汽,经3—5min,水洗。 cQ8dc+ {
BRQ"A,
(2)用3%盐酸酒精脱色,直至标本无色脱出为止,充分水洗。 rr |"r
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(3)用美蓝染色液复染约1min,水洗。 Dn~Z SrJ
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(4)吸干或烘干,镜检。抗酸性细菌呈红色,非抗酸性细菌呈蓝色。 j((hqJr
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以下方法也可:即在干燥、固定好的抹片上,滴加石炭酸复红染色1min,水洗,用1%美蓝染色液复染约20s,水洗。 8@E8!w&~
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对光观察,标本务必全呈蓝色,在火焰上烘干、镜检。抗酸性细菌呈红色,非抗酸性细菌和背景呈蓝色。 yZq?B
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4.瑞氏染色法 82lr4
K!GUv{fp
(1)抹片自然干燥后,滴加瑞氏染色液于其上,为了避免很快变干,染色液可稍多加些,或看情况补充滴加,经1—3min,加约与染液等量的中性蒸馏水或PBS液,轻轻晃动玻片,使与染液混匀,约3min左右,直接用水冲洗(不可先将染液倾去),吸干或烘干、镜检。细菌染成蓝色,组织、细胞等物呈其它颜色。 2=>*O
L>SZgmV+
(2)另一方法 抹片自然干燥后,按涂抹点大小,盖上一块略大的清洁滤纸片,在其上轻轻滴加染色液,至略浸过滤纸,并看情况进行补滴,维持不使变干;染色3--5min,直接用水冲洗,吸干或烘干、镜检。此法使染色液经滤纸过滤,可大大避免沉渣粘附于抹片上影响镜检观察。 GGH;Z WSe
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5.姬姆萨染色法 Q/p(#/y#b
DlDB=N0@S
(1)于5ml新煮过的中性蒸馏水中滴加5—10滴姬姆萨氏染色液原液,即稀释成为常用的姬姆萨氏染色液。 ASR-a't6
XTV0Le\f
(2)抹片经甲醇固定干燥后,在其上滴加足量的染色液或将抹片浸入盛有染色液的染色缸中,染色30min,或者染色数小时至24h,取出水洗,吸干或烘干、镜检。细菌呈蓝青色,组织、细胞等呈其它颜色。视野常呈淡红色。 */nuv
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6.克利特氏荚膜染色法 z
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‘(1)染色液配制 {gsW(T>)
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①美蓝溶液 美蓝1g,95%酒精10ml,蒸馏水100ml。将美蓝溶于酒精内,再加蒸馏水混合。 S/VA~,KCe;
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②碱性复红溶液 碱性复红0.03g,95%酒精1ml,蒸馏水99ml。将碱性复红溶于酒精内,再加蒸馏水混合。 y`rL=N#
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(2)染色法 yxvjg\!&
M|k&TTV
①涂片经火焰固定后,滴加美蓝溶液,将玻片至火焰上面加热至发生蒸汽为止。 (etUEb^}T
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②水洗,以碱性复红溶液复染15—30s。
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③水洗后、吸干、镜检。 8"i/wMP]
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④染色后,菌体呈蓝色,荚膜呈红色。 g2=}G <*0
E5gl ^Q?Z
7.结晶紫福尔马林荚膜染色法 xQo~%wW,?
K_>/lirE?
(1)染色配制 y@3kU*-1
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①结晶紫福尔马林染色液 结晶紫10g,福尔马林溶液100ml。混合使其完全溶解,隔夜过滤。 i=L8=8B`
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②碱性复红溶液 见前:克利特氏荚膜染色法 P?J kP
BC({ EE~R)
(2)染色法 4.Z(:g
bnr|Y!T}Bi
①涂片用结晶紫福尔马林染色液染色0.5—1min。 [D[D`gpjA
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②水洗后,以碱性复红染色液复染15—30s。 6m+W#]^
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③水洗、吸干、镜检。 .&iN(Bd
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④染色后,菌体呈深蓝色,荚膜呈淡红色。 -~O/NX
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8.番红染色液荚膜染色法 -:SIS`0s
Z`s!dV]e9
(1)染液配制 番红(或沙黄)0.7g,95%酒精20ml,蒸馏水15ml。 3dG4pl~
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将番红溶解于酒精内,再加蒸馏水混合而成。 ,I`_F,
VR4%v9[1
(2)染色法 9m8ee&,
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①涂片滴加番红染色液,将玻片置火焰上加热至发生蒸气约5min。
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②水洗、吸干、镜检。
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③染色后,菌体呈暗红色,荚膜呈淡黄色。 o:UXPAj
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9.赫斯氏荚膜染色法 (F8AL6
LC-)'Z9}5
(1)染色液配制 !Iq{ 5:
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①龙胆紫酒精溶液 龙胆紫酒精饱和液5ml,蒸馏水95ml。 -3hCiKq
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②硫酸铜水溶液 硫酸铜20g,蒸馏水100ml。 f0oek{
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(2)染色法 o6|-=FcvC
Q%5F ]`VN
①涂片加热固定,将龙胆紫酒精溶液滴加于玻片。将玻片置火焰上微加热至见蒸气并保持蒸气约20min。 5I,$EGG
ax@H"d&
②用硫酸铜液代替水冲洗染液,用吸水纸吸干、镜检。 CV^c",b_
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③染色后,菌体呈深紫色,荚膜呈浅蓝色。 !T'X
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10.安沙尼氏荚膜染色法 z $6JpG
+Me2U9
(1)染色液配制 OVs wt
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①1%结晶紫水溶液。 [Ox(.
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②20%硫酸铜水溶液。 G)7)]yBL
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(2)染色法 ((MLM3zJ
CLK^ gZ
①将涂片在空气中自然干燥。 _ #'9kx|)
G5c7:iGm/c
②以1%结晶紫水溶液染色2min(不必加热),再以20%硫酸铜代水冲洗染液。 nj2gs,k
KQ)T(mIqp
③吸干、镜检。 s4t0f_vj
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z="L4
④染色后,菌体呈紫色,荚膜呈淡紫色。 4lz{G*u
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11.苗列尔氏芽孢染色法 \4s;!
R!
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(1)染色液配制 fNoR\5}!
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①媒染液 5%铬酸液(铬酸5ml,加蒸馏水95ml) %h+uD^^$
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②染色液 石炭酸复红液 6%?A>
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③脱色液 2%硫酸液(纯硫酸2ml,加蒸馏水98ml) ma]?
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④复染液 碱性美蓝 Bp3
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(2)染色法
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涂片,干燥,火焰固定,用媒染液染色10min,充分水洗,用炭酸酸复红液加温染色(最好在标本上覆盖一张滤纸)2min,水洗,用脱色剂脱色10s,水洗,用美蓝液复染1min,水洗,干燥、镜检。 !6E:5=L^
结果:芽孢呈红色,菌体呈蓝色。 lzfDH=&
E@pFTvo
12.孔雀绿沙黄芽孢染色法 3!Bj{;A
A&l7d0Z^j5
(1)染色液 5%孔雀绿液,0.5%沙黄液。 $4Y&j}R
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(2)染色法 RpN <=
.Cr1,Po
涂片火焰固定,加5%孔雀绿液微微加温染色30s—1min,至发生蒸气为止,待冷后水洗,再加沙黄液复染30s,水洗,干燥后镜检。 k1iLnza%
U Um|@
结果:芽孢呈绿色,菌体其它部分呈淡红色。 ]fC7%"nB
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13.李富逊氏鞭毛染色法 iGa}3
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w_H2gaQ
(1)染色液配制 5%钾明矾水溶液10ml,20%鞣酸水溶液10ml,1%碱性复红酒杯精溶液10ml。 KZ3B~#oQ
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将上述三种溶液按次混合配成,如发生沉淀,用其上清液,本染液保存1周,复染液可用下列染液:美蓝0.1g,硼砂0.5g,蒸馏水100ml。 [<Jp#&u6sb
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(2)染色法 -<d(
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①所用的载玻片必须十分清洁无油脂、无划痕。可将玻片先浸于重铬酸钾清洁液数天,用镊子取出后以清水冲洗干净(冲洗时切勿用手捏玻片),然后斜插于木架上,置37度温箱中任其干燥后备用。 >13/h]3
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②菌液最好用10—16h的幼年肉汤培养物。若取自琼脂培养基上的菌落,则用接种环挑取少许,置蒸馏水中制成轻度混浊的细菌悬液,切忌用接种环多作搅动,以免损伤鞭毛。 [`9^QEj
0BDoBR
③挑取肉汤培养物或细菌悬液一环,轻置于玻片一滴,玻片作倾斜放置,使菌液沿玻片面顺向下流,自成一薄菌膜,置37度恒温箱内干燥。 [' t8C
mQ=sNZ-d]
④将上述染液滴加于涂片上,染10—15min,染色时间的长短随室温的高低而不同,如在冬季,可置于37度温箱内染色。 , `"K
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⑤轻轻地水洗1—2min。 m0C{SBn-M
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⑥在室温或37度温箱内任其干燥后作镜检,细菌菌体及鞭毛呈红色。 S;h&5.p
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⑦如需复染色,则用上述美蓝硼砂复染液在水洗后,染色10min,用水冲洗,干燥后作镜检。菌体呈蓝色,鞭毛呈红色。 _G[6+g5|
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⑧良好的鞭毛染色涂片,应在显微镜的视野中见到大部分细菌菌体均附有鞭毛。 F;W'
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14.过碘酸锡夫氏真菌染色法 S%{lJYwXt
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(1)染色液配制 甲液:1%过碘酸液 乙液:碱性复红0.1g,95%乙醇5ml,蒸馏水95ml 丙液:亚硫酸氢锌1g,酒石酸0.5g,蒸馏水100ml UT~4Cfb
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丁液:1.22%饱和苦味酸液 Cg7)S[zl
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(2)染色法 S,VyUe4P4
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将标本在甲液中染10min,水洗后再用乙液染2—3min,置丙液中染30—40min,至玻片呈淡红色为合适,水洗1min,再置于丁液中染3min。充分水洗至无黄色液体为止。脱水、透明,树胶封固后镜检。 eZA6D\
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结果:真菌组织染色鲜红色。 N|o>%)R
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15.中国蓝真菌染色法 }]`}Ja
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(1)染色液 纯石炭酸20ml,乳酸20ml,甘油40ml,蒸馏水20ml。 lqauk)(A0
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将上述成分混合,加温溶解后加入中国蓝0.05g,混合振荡即成。 i"vDRrDe
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(2)染色法 qR_SQ
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先将染色液加在载玻片上,将培养物被检样放在玻片上的染色液中,涂匀后覆盖盖玻片,微加温后镜检。 y>4p~
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16.黑色素螺旋体染色法 3mybG%39
4bE42c=Ca7
(1)染色液配制 黑色素5g,蒸馏水50ml。混合加热使其溶解,在溶液中加1%福尔马林作防腐剂,临用前过滤。 9OH.&g
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(2)染色法 取被检物一滴,墨汁一滴混合后涂片,室温下放干燥后镜检。 S io1Q0
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结果:螺旋体无色发亮,背景呈黑色。 vs*>onCf
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17.墨汁螺旋体染色法 t2~"B&7My
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(1)染色液 印度墨汁5ml,蒸馏水20ml,震荡混合而成。 1<;\6sg
Fka1]|j9
(2)染色法 取被检物一滴,墨汁一滴混合后涂片,室温下放干燥后镜检。 0kkRK*fp}x
K<D`(voL
结果:螺旋体无色发亮,背景呈黑色。 v`@5enr
N'htcC
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