1.美蓝染色法 在已干燥、固定好的抹片上,滴加适量的美蓝染色液,经1—2min,水洗,沥去多余的水分,吸干或烘干,镜检。 .[
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2.革兰氏染色法 mUfA
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(1)在已干燥、固定好的抹片上,滴加草酸铵结晶紫染色液,经1—2min,水洗。 H on,-<
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(2)加革兰氏碘溶液于抹片上媒染,作用1—3min,水洗。 LYuMR,7E
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(3)加95%酒精于抹片上脱色,约30s---1min,水洗。 ;y;UgwAM
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(4)加碱性复红液(或沙黄或稀释石炭酸复红液)复染10---30s,水洗。 brdY97s4
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(5)吸干或烘干,镜检。革兰氏阳性菌呈蓝紫色,革兰氏阴性菌呈红色。 pYj}
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3.抗酸性染色法 SpMHq_MLM
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(1)在已干燥、固定好的抹片上,滴加较多量的石炭酸复红染色液,在玻片下以酒精灯火焰缓缓加热,至发生蒸汽即止,维持微微发生蒸汽,经3—5min,水洗。 v"sN
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(2)用3%盐酸酒精脱色,直至标本无色脱出为止,充分水洗。 ,ysn7Y{Y
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(3)用美蓝染色液复染约1min,水洗。 Lmc"qFzK
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(4)吸干或烘干,镜检。抗酸性细菌呈红色,非抗酸性细菌呈蓝色。 TYedem<$
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以下方法也可:即在干燥、固定好的抹片上,滴加石炭酸复红染色1min,水洗,用1%美蓝染色液复染约20s,水洗。 { pu .l4nk
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对光观察,标本务必全呈蓝色,在火焰上烘干、镜检。抗酸性细菌呈红色,非抗酸性细菌和背景呈蓝色。 0{>P^z
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4.瑞氏染色法 _UUp+Hz
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(1)抹片自然干燥后,滴加瑞氏染色液于其上,为了避免很快变干,染色液可稍多加些,或看情况补充滴加,经1—3min,加约与染液等量的中性蒸馏水或PBS液,轻轻晃动玻片,使与染液混匀,约3min左右,直接用水冲洗(不可先将染液倾去),吸干或烘干、镜检。细菌染成蓝色,组织、细胞等物呈其它颜色。 mTZgvPJ!
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(2)另一方法 抹片自然干燥后,按涂抹点大小,盖上一块略大的清洁滤纸片,在其上轻轻滴加染色液,至略浸过滤纸,并看情况进行补滴,维持不使变干;染色3--5min,直接用水冲洗,吸干或烘干、镜检。此法使染色液经滤纸过滤,可大大避免沉渣粘附于抹片上影响镜检观察。 XLFo"f
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5.姬姆萨染色法 .8Gmy07
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(1)于5ml新煮过的中性蒸馏水中滴加5—10滴姬姆萨氏染色液原液,即稀释成为常用的姬姆萨氏染色液。 [X=Ot#?u ~
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(2)抹片经甲醇固定干燥后,在其上滴加足量的染色液或将抹片浸入盛有染色液的染色缸中,染色30min,或者染色数小时至24h,取出水洗,吸干或烘干、镜检。细菌呈蓝青色,组织、细胞等呈其它颜色。视野常呈淡红色。 44_CT?t<
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6.克利特氏荚膜染色法 Fd@:*ER
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‘(1)染色液配制 "e~"-B7(\Y
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①美蓝溶液 美蓝1g,95%酒精10ml,蒸馏水100ml。将美蓝溶于酒精内,再加蒸馏水混合。 N;d@)h(N!
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②碱性复红溶液 碱性复红0.03g,95%酒精1ml,蒸馏水99ml。将碱性复红溶于酒精内,再加蒸馏水混合。 XxEKv=_bc
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(2)染色法 '1yy&QUZq
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①涂片经火焰固定后,滴加美蓝溶液,将玻片至火焰上面加热至发生蒸汽为止。 xYCX}bksh
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②水洗,以碱性复红溶液复染15—30s。 ');QmN%J
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③水洗后、吸干、镜检。 _P*<T6\J>
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④染色后,菌体呈蓝色,荚膜呈红色。
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7.结晶紫福尔马林荚膜染色法 ;f7;U=gl,
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(1)染色配制 dT
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①结晶紫福尔马林染色液 结晶紫10g,福尔马林溶液100ml。混合使其完全溶解,隔夜过滤。 s]=s|
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②碱性复红溶液 见前:克利特氏荚膜染色法 <([1(SY2e
nsJN)Pt
(2)染色法 `"<} B"s
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①涂片用结晶紫福尔马林染色液染色0.5—1min。 U>z8gdzu
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②水洗后,以碱性复红染色液复染15—30s。 pO
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③水洗、吸干、镜检。 -VESe}c:nQ
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④染色后,菌体呈深蓝色,荚膜呈淡红色。 c%aY6dQG&%
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8.番红染色液荚膜染色法 _-*Lj;^V
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(1)染液配制 番红(或沙黄)0.7g,95%酒精20ml,蒸馏水15ml。 kne{Tp
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将番红溶解于酒精内,再加蒸馏水混合而成。 d*Y&V$?zl
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(2)染色法 zLlu%Oc
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①涂片滴加番红染色液,将玻片置火焰上加热至发生蒸气约5min。 H'E>QT
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②水洗、吸干、镜检。 m<wng2`NTv
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③染色后,菌体呈暗红色,荚膜呈淡黄色。 5Cd>p<
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9.赫斯氏荚膜染色法 y88FT#hR|5
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(1)染色液配制 =yiRB?
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①龙胆紫酒精溶液 龙胆紫酒精饱和液5ml,蒸馏水95ml。 RF
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②硫酸铜水溶液 硫酸铜20g,蒸馏水100ml。 \~1M\gZP
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(2)染色法 o`HZS|>K*
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①涂片加热固定,将龙胆紫酒精溶液滴加于玻片。将玻片置火焰上微加热至见蒸气并保持蒸气约20min。 PD12gUU?
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②用硫酸铜液代替水冲洗染液,用吸水纸吸干、镜检。
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③染色后,菌体呈深紫色,荚膜呈浅蓝色。 (,`ypD +3q
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10.安沙尼氏荚膜染色法 YYHtd,0\+
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(1)染色液配制 n5A0E 2!
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①1%结晶紫水溶液。 `:!mPNW#
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②20%硫酸铜水溶液。 5\}A8Ng
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(2)染色法 W"+*%x
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①将涂片在空气中自然干燥。 " m<]B
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②以1%结晶紫水溶液染色2min(不必加热),再以20%硫酸铜代水冲洗染液。 %N_5p'W
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③吸干、镜检。 (:Rj:8{
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④染色后,菌体呈紫色,荚膜呈淡紫色。 |u8IQR'B
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11.苗列尔氏芽孢染色法 $L_-U~^
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(1)染色液配制 Gs;wx_k^
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①媒染液 5%铬酸液(铬酸5ml,加蒸馏水95ml) 3ha^NjE
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②染色液 石炭酸复红液 P*Va<'{:{
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③脱色液 2%硫酸液(纯硫酸2ml,加蒸馏水98ml) |`[0U
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④复染液 碱性美蓝 MJ "ug8N
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(2)染色法 &$$KC?!w
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涂片,干燥,火焰固定,用媒染液染色10min,充分水洗,用炭酸酸复红液加温染色(最好在标本上覆盖一张滤纸)2min,水洗,用脱色剂脱色10s,水洗,用美蓝液复染1min,水洗,干燥、镜检。 Q(v*I&k
结果:芽孢呈红色,菌体呈蓝色。 -yyim;Nj
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12.孔雀绿沙黄芽孢染色法 \%&BK.t
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(1)染色液 5%孔雀绿液,0.5%沙黄液。 96G8B62
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(2)染色法 -_@zyF<G
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涂片火焰固定,加5%孔雀绿液微微加温染色30s—1min,至发生蒸气为止,待冷后水洗,再加沙黄液复染30s,水洗,干燥后镜检。 1M@OBfB8
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结果:芽孢呈绿色,菌体其它部分呈淡红色。 \e)>]C}h
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13.李富逊氏鞭毛染色法 aMv?D(Meb
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(1)染色液配制 5%钾明矾水溶液10ml,20%鞣酸水溶液10ml,1%碱性复红酒杯精溶液10ml。 HpLCOY1-
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将上述三种溶液按次混合配成,如发生沉淀,用其上清液,本染液保存1周,复染液可用下列染液:美蓝0.1g,硼砂0.5g,蒸馏水100ml。 qStZW^lFeY
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(2)染色法 )wZ
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①所用的载玻片必须十分清洁无油脂、无划痕。可将玻片先浸于重铬酸钾清洁液数天,用镊子取出后以清水冲洗干净(冲洗时切勿用手捏玻片),然后斜插于木架上,置37度温箱中任其干燥后备用。 srbES6
KUD.hK.
②菌液最好用10—16h的幼年肉汤培养物。若取自琼脂培养基上的菌落,则用接种环挑取少许,置蒸馏水中制成轻度混浊的细菌悬液,切忌用接种环多作搅动,以免损伤鞭毛。 ^uiQZ%;
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③挑取肉汤培养物或细菌悬液一环,轻置于玻片一滴,玻片作倾斜放置,使菌液沿玻片面顺向下流,自成一薄菌膜,置37度恒温箱内干燥。 yf4I<v$y
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④将上述染液滴加于涂片上,染10—15min,染色时间的长短随室温的高低而不同,如在冬季,可置于37度温箱内染色。 :QoW*Gs1
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⑤轻轻地水洗1—2min。 ?<;9=l\Q
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⑥在室温或37度温箱内任其干燥后作镜检,细菌菌体及鞭毛呈红色。 Vi m::
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⑦如需复染色,则用上述美蓝硼砂复染液在水洗后,染色10min,用水冲洗,干燥后作镜检。菌体呈蓝色,鞭毛呈红色。 8P?p
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⑧良好的鞭毛染色涂片,应在显微镜的视野中见到大部分细菌菌体均附有鞭毛。 5r1u_8)'
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14.过碘酸锡夫氏真菌染色法 JT p+&NS
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(1)染色液配制 甲液:1%过碘酸液 乙液:碱性复红0.1g,95%乙醇5ml,蒸馏水95ml 丙液:亚硫酸氢锌1g,酒石酸0.5g,蒸馏水100ml '" 4;;(
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丁液:1.22%饱和苦味酸液 aGAeRF
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(2)染色法 Fhrj$
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将标本在甲液中染10min,水洗后再用乙液染2—3min,置丙液中染30—40min,至玻片呈淡红色为合适,水洗1min,再置于丁液中染3min。充分水洗至无黄色液体为止。脱水、透明,树胶封固后镜检。 6
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结果:真菌组织染色鲜红色。 bo-L|R&O
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15.中国蓝真菌染色法 nN2huNTf:
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(1)染色液 纯石炭酸20ml,乳酸20ml,甘油40ml,蒸馏水20ml。 "s.hO0Z
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将上述成分混合,加温溶解后加入中国蓝0.05g,混合振荡即成。 n%6ba77
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(2)染色法 B|"-Ed
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先将染色液加在载玻片上,将培养物被检样放在玻片上的染色液中,涂匀后覆盖盖玻片,微加温后镜检。 jp7cPpk:LG
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16.黑色素螺旋体染色法 :O7n*lwx
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(1)染色液配制 黑色素5g,蒸馏水50ml。混合加热使其溶解,在溶液中加1%福尔马林作防腐剂,临用前过滤。 %NDr5E^cc
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(2)染色法 取被检物一滴,墨汁一滴混合后涂片,室温下放干燥后镜检。 2w
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M0T z('~s
结果:螺旋体无色发亮,背景呈黑色。 c#f@v45
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17.墨汁螺旋体染色法 &smZ;yb|'h
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(1)染色液 印度墨汁5ml,蒸馏水20ml,震荡混合而成。 D/afa8>LQH
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(2)染色法 取被检物一滴,墨汁一滴混合后涂片,室温下放干燥后镜检。 fRT4>So
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结果:螺旋体无色发亮,背景呈黑色。
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